Optimisation et validation d’une méthode de dosage de la tyrosine dans le sérum par HPLC

Loading...
Thumbnail Image

Date

2018-07-11

Journal Title

Journal ISSN

Volume Title

Publisher

Faculté de médecine université deTIZI OUZOU

Abstract

La tyrosinémie héréditaire est une aminoacidopathie qui affecte principalement le nouveau-né et l’enfant. Elle est sévère et souvent fatale. Son diagnostic requière le dosage des acides aminés impliqués ou de leurs métabolites. L’objectif de notre travail est d’optimiser et de valider une méthode de dosage de la tyrosine dans le sérum humain par chromatographie liquide à haute performance HPLC couplée à un détecteur spectrofluorimétrique selon les directives de la commission de la société française des sciences et techniques pharmaceutiques (SFSTP) publiée dans la revue STP Pharma pratique en janvier 2006 qui repose sur le profil d’exactitude comme outil de décision. Notre travail a été effectué sur une période de 6 mois (de novembre 2017 à mai 2018) au niveau du laboratoire de chimie analytique du département de pharmacie de Tizi Ouzou. Le protocole de validation a été appliqué sur des standards d’étalonnage sans matrice et des standards de validation avec une matrice constituée d’un sérum biologique, nous avons procédé à une déprotéinisation par l'acide trichloracétique (TCA), une solution de dihydrogénophosphate(KH2PO4) est utilisée comme phase mobile pour la séparation par HPLC en phase inverse (C8). La tyrosine est détectée et quantifiée en utilisant sa propriété de fluorescence naturelle générée par une excitation à une longueur d’onde de 210 nm et une émission à 302 nm. La technique développée s’est avérée spécifique, linéaire, et exacte dans l’intervalle [10.29 ; 200] μmol/l avec un risque d’avoir au maximum 15% des mesures en dehors des limites d’acceptations fixées à [-15% ; +15%], Ce qui atteste la validité de la méthode proposée dans le présent travail. La validation de cette technique de dosage par HPLC permettra d’avoir une méthode de dosage qui permet le dépistage et le suivi des patients tyrosinémiques avec toute l’exactitude, la spécificité, la précision, et la sensibilité analytique requise ; en plus qu’elle est facile, rapide et économique.

Description

Keywords

Tyrosinémie, Chromatographie liquide à haute performance, Validation analytique, Pédiatrie

Citation